El objetivo de esta práctica es observar e interpretar fotografías de distintas fases de la mitosis en células vegetales.
Material necesario:
- Microscopio.
- Porta y cubre-objetos.
- Vidrio de reloj.
- Pinzas finas.
- Tiras de papel de filtro.
- Orceína acética clorhídrica.
- Un bulbo de cebolla.
- Pinzas de madera.
- Mechero de alcohol.
Fundamento:
El proceso de reproducción celular conocido con el nombre de mitosis, puede ser estudiado eligiendo un material constituido por células que se hallen en continua división. Esta condición la reúnen los meristemos terminales o primarios, tales como los que se encuentran en el ápice de las raíces.
Un bulbo de cebolla cuya base se mantenga en contacto con el agua durante 4 ó 5 días, nos proporciona abundante cantidad de raicillas jóvenes, muy apropiadas para la obtención de muestras destinadas a observar figuras de mitosis.
Unos cinco días antes de realizar la práctica, se colocará un bulbo de cebolla tapando la boca de un frasco, que se llena hasta que el agua toca la base de la cebolla. Se logra así el desarrollo de numerosas raicillas jóvenes, cuando éstas tengan una longitud de 3 centímetros es el momento adecuado para hacer la preparación.
- Cortar con unas tijeras finas o cuchilla de afeitar, los 5 últimos milímetros de las raicillas, depositándolas en un vidrio de reloj .
- Cubrir la muestra con orceína acética clorhídrica. Aproximadamente unos 2 cm3 de orceína.
- Dejar que actúe el colorante durante 10 minutos.
- Tomar el vidrio de reloj por los bordes, ayudándonos de una pinza de madera y calentarlo suavemente a la llama del mechero, evitando la ebullición y esperar hasta que se emitan vapores tenues.
- Con las pinzas finas tomar con cuidado una raíz y colocarla sobre un porta, cortar los últimos 2 ó 3 milímetros y desechar el resto.
- Colocar el cubre-objetos y encima una almohadilla hecha con papel de filtro sobre la que se ejerce presión con el dedo pulgar, primero suave, después más intensa, para aplastar la muestra, técnica conocida como squash.
- Aspirar con el papel de filtro el exceso de colorante.
- Observar al microscopio primero a pequeño aumento y luego con aumentos mayores, recorriendo diversos campos para descubrir en las células observadas, las distintas fases de la mitosis.
Observación al microscopio:
La preparación presenta el aspecto de una dispersión de células por todo el campo que abarca el microscopio. Se observarán células en distintas fases o estados de división celular. Con esta técnica de tinción se ven los cromosomas impregnados por la orceína en color morado. El aspecto reticulado, así como el mayor tamaño de algunos núcleos, corresponde a las células que se encontraban en los procesos iniciales de la división mitótica.
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Dispersión de células por todo el campo
PROFASE
METAFASE
ANAFASE
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